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梯度洗脱方法分离头孢类药物

时间:2011-12-22 点击次数:5057

梯度洗脱方法分离头孢类药物

 

一、试验方法

Cometro高效液相色谱系统

色谱柱: Kromasil BDS C18250*4.6mm5um

流动相:A 磷酸盐缓冲溶液(0.87g磷酸二氢钾与0.22g无水磷酸氢二钠,加水稀释至1000ml,摇匀)-乙腈-三乙胺(95:5:1

       B 乙腈

检测波长:254nm

流速:1ml/min

样品:头孢氨苄样品(0.2mg/ml),头孢地嗪钠样品(0.2mg/ml),头孢呋辛钠样品(0.2mg/ml),头孢克洛样品(0.2mg/ml),头孢拉定样品(0.2mg/ml),头孢羟氨苄样品(0.2mg/ml),头孢西丁钠样品(0.2mg/ml),头孢唑肟钠样品(0.2mg/ml),头孢类混合样品。

进样量:10ul

二、实验结果与分析

1. 等度实验

流动相:磷酸盐缓冲溶液-乙腈-三乙胺(80:20:1),将不同样品分别进样,将分析结果叠加到同一张色谱图上。

放大谱图,在3-4min的峰有重叠,若在相同条件下,混合样品中各组分将无法分开。

2. 梯度试验

梯度方案

时间/min

流动相A/%

流动相B/%

0

100

0

15

68

32

18

68

32

20

100

0

 

 

Retention Time

Theoretical plates (USP)

Resolution (USP)

10.145

87953

0.00000

11.895

161617

13.71554

12.518

190195

5.34659

12.735

146310

1.74737

13.022

198555

2.29271

15.637

152900

18.89121

16.270

172834

4.00212

16.497

224280

1.53216

 

混合物中八种组分完全分开,分离度达到要求。

三、结论

梯度洗脱方法可以通过连续或间断地改变流动相的组成,调节流动相极性,使每个流出组分都有合适的容量因子k′,使在等度系统中无法分离的样品得到良好的分离效果。

 

 

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