HPLC使用注意事项

HPLC使用注意事项

      1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。

      2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

      3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

      4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲 洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。

      5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。

      6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

      7.C18柱不能进蛋白样品，血样、生物样品。

      8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法：①以异丙醇作溶剂冲洗；②放在异丙醇中间用超声波清洗；③用10％稀硝酸清洗。

      9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

      10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

      11.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的 流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

13.峰形问题：按常规峰宽应该在谱图上从头到尾以正常顺序增加。峰不对称性可能是多方面原因造成的：色谱系统、柱、进样程序、流路系统、样品组成等，轻微的拖尾是正常的。分析拖尾应从原因联系考虑----用的什么色谱方法、样品的结构、流动相组成和PH以及在分离条件下样品是离子型或分子型。

表一、峰形的影响原因