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一、实验方法
Cometro高效液相色谱系统；
紫外检测器波长：278nm；
Kromasil C18 250*4.6mm 5u 色谱柱；
柱温：25℃；
流动相：0.025mol/L磷酸溶液（用三乙胺调pH=3.0）：乙腈=87:13；
流速：1.00ml/min；
诺氟沙星对照品-0.15mg/ml，样品；
进样量：对照品分别进样5ul，7.5ul，10ul，12.5ul，15ul各3次，样品进样10ul，使样品与标准品1:1混合再进样10ul，考察线性相关性，保留时间重现性，回收率。
二、谱图结果
附进样量，保留时间，峰面积关系表：
进样量 保留时间/min 峰面积/103 标准品5ul 10.533 728.12 标准品7.5ul 10.541 979.1 标准品10ul 10.528 1230.741 标准品12.5ul 10.524 1460.44 标准品15ul 10.401 1732.42 样品10ul 10.517 1029.987 样品标准品1比1混合10ul 10.213 1120.78
三、结果运算
1、保留时间重现性考察：
|
保留时间 |
10.533 |
10.541 |
10.528 |
10.524 |
10.401 |
|
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RSD |
0.5588% |
|||||
2、线性相关性考察及样品含量计算：
以标准品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得线性方程：
由此可算出样品中诺氟沙星含量0.1205mg/ml。
3、回收率考察：
根据上面线性方程可算出混合后样品含诺氟沙星0.1342mg/ml，而实际真值是0.1352mg/ml，因此得回收率为99.20%。
四、综述
1、此三项考察综合考察了Cometro 6000 PVW UV/VIS检测器的吸收稳定性，Cometro 6000 LDI泵的流量性，进样伐、进样针的性，Kromasil色谱柱的性。
2、本实验流动相中三乙胺看似作用是调节pH，其实际作用是调整峰型，因为诺氟沙星有含氮极性基团，在酸性环境中容易与色谱柱中的硅羟基产生静电作用而拖尾，如下图：
而三乙胺可以代替物质与硅羟基作用，保证了物质的峰型。因此调节pH时候得注意三乙胺的加入量，不能过少，可以直接加入适量三乙胺，再用磷酸调节pH。
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