黄曲霉毒素是黄曲霉在生长繁殖过程中产生的一组有毒代谢产物,黄曲霉毒素主要污染粮食和油料作物,如花生、玉米、大米、棉籽等。黄曲霉毒素对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。因此国际上对食品中黄曲霉毒素有严格的限量要求。
本文采用高效液相荧光检测器—柱后衍生法对黄曲霉毒素进行测定,通过色谱柱的选择,流动相配比的优化以及检测器条件的调整等手段,以期得到黄曲霉毒素的分离效果。
一、实验方法
Cometro高效液相色谱系统;
荧光检测器,激发波长360nm,发射波长450nm;
Cometro柱后衍生系统,柱后衍生70度,衍生剂:碘的0.03%甲醇水溶液,流速0.3ml/min;
流动相:甲醇-乙腈-水;
流速:0.8ml/min;
色谱柱:多种品牌的十八烷基键合硅胶柱;
样品:黄曲霉毒素储备液;
二、结果与分析
1、色谱柱的选型
采用四种不同品牌的C18色谱柱,分别标记为进口柱1、进口柱2、进口柱3、Comatex柱。流动相比例为甲醇-乙腈-水=40:18:42,进样量为10μl,比较其分离效果。
由实验结果可以看出,四种不同填料的色谱柱中,Comatex柱的分离效果,但仍然不能得到一个良好的分离度,因此,通过改变流动相的比例来进一步改善分离效果。
2、流动相配比的优化
通过上述实验,选择分离效果的Comatex柱,调节流动相的比例为甲醇-乙腈-水=40:10:50,其他实验条件不变。
在该条件下,可以得到一个较好的分离效果。
3、检测器条件的调整
将工作液稀释25倍后,进样量分别为5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,测定样品的标准曲线。
噪音大灵敏度低,信噪比、分离度差。
优化调整检测器条件,使用Comatex C18色谱柱,优化流动相,重复上述实验。
上述结果显示,基线噪音(0.2mv),灵敏度,信噪比(>10),柱效(>9000),主峰之间的分离度(>1.5)。
三、结论
通过色谱柱的选择,流动相配比的优化,以及灯的能量的调节,可以提高分离度,降低噪音,提高灵敏度,得到良好的分离效果。采用高效液相荧光检测器-柱后衍生法测定黄曲霉毒素,选用Comatex色谱柱;流动相为甲醇-乙腈-水=40:10:50;优化检测器条件,可以得到分离效果。
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